采用 Cary 8454 和 Cary 60 紫外-可見 分光光度計(jì)

進(jìn)行測定的比較

前言

方法開發(fā)和驗(yàn)證用于證明所有新儀器在現(xiàn)有儀器的操作范圍和可接受標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)，能夠 提供相同的結(jié)果。將方法從一臺(tái)儀器轉(zhuǎn)移至另一臺(tái)儀器時(shí)，驗(yàn)證要求取決于 GMP 指 南，來確保結(jié)果的一致性和重現(xiàn)性。

本研究展示了在使用紫外-可見 ChemStation 軟件的 Cary 8454 紫外-可見分光光度計(jì) 與使用 Cary WinUV 軟件的 Cary 60 紫外-可見分光光度計(jì)之間的方法轉(zhuǎn)移。同時(shí)通過 對比證明了兩種分光光度計(jì)系統(tǒng)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。方法的任何其他驗(yàn)證要求 均需要滿足法規(guī)指南和可接受標(biāo)準(zhǔn)。

實(shí)驗(yàn)部分

設(shè)備

–     Cary 8454 紫外-可見分光光度計(jì)

–     紫外-可見 ChemStation 軟件

–     Cary 60 紫外-可見分光光度計(jì)

–     Cary WinUV 軟件

試劑

–      空白溶液：    0.00 mg/L 高氯酸空白

–      標(biāo)準(zhǔn)溶液：    40 mg/L、80 mg/L 和 120 mg/L 重鉻酸鉀

–      樣品溶液：    約 75 mg/L 重鉻酸鉀

第 1 部分：確定分析波長

使用 40 mg/L 的重鉻酸鉀樣品確定合適的波長，并使用 Cary  8454 和 Cary 60 紫外-可見分光光度計(jì)在該波長下生成校準(zhǔn)曲線。

儀器參數(shù)：Cary 8454

–      ChemStation 軟件：    標(biāo)準(zhǔn)模式，光譜/峰任務(wù)

–      波長顯示：                  200–800 nm

–      積分時(shí)間：                 0.5 秒

–      峰/峰谷查找：             查找并標(biāo)注最多兩個(gè)峰

儀器參數(shù)：Cary 60

–      WinUV 軟件：             “掃描"應(yīng)用程序

–      波長顯示：                  200–800 nm

–      掃描速度：                  高級(jí)設(shè)置：數(shù)據(jù)間隔 3 nm

–      基線：                        所選校正

–      峰信息：                      峰閾值 0.010 ，X 標(biāo)注（圖 1）

圖 1. 在 Cary WinUV 設(shè)置菜單中設(shè)置峰標(biāo)注

方法

開啟 Cary 8454 紫外-可見分光光度計(jì)，將燈預(yù)熱一小時(shí)。在 預(yù)熱過程中，打開紫外-可見 ChemStation 軟件，選擇“標(biāo)準(zhǔn) 模式"進(jìn)行分析并輸入?yún)?shù)。預(yù)熱后，使用高氯酸空白進(jìn)行空 白讀數(shù)。使用 40 mg/L 高氯酸溶液采集單個(gè)光譜， 從而確定 分析波長。

Cary 60 紫外-可見分光光度計(jì)不需要預(yù)熱。打開 Cary WinUV 軟件，選擇“掃描"應(yīng)用程序并輸入?yún)?shù)。使用高氯酸空白進(jìn) 行基線采集，然后采集 40 mg/L 重鉻酸鉀溶液的掃描結(jié)果。

結(jié)果

在 Cary 8454 紫外-可見分光光度計(jì)和 Cary 60 分光光度計(jì)上采 集的重鉻酸鉀譜圖具有高度重現(xiàn)性，且在 257 nm 和 350 nm 處鑒定出了相同的峰（圖 2a 和 2b）。

圖 2a. 展示重鉻酸鉀光譜的紫外-可見 ChemStation 軟件，圖中在 257 nm 和

350 nm 處鑒定出兩個(gè)峰。采集自 Cary 8454 紫外-可見分光光度計(jì)

圖 2b. 展示重鉻酸鉀光譜的 Cary WinUV 軟件，圖中在 257 nm 和 350 nm 處 鑒定出兩個(gè)峰。采集自 Cary 60 分光光度計(jì)

第 2 部分：確定未知樣品濃度

在 Cary 8454 紫外-可見分光光度計(jì)和 Cary 60 中使用三種重 鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液生成校準(zhǔn)曲線。選擇的分析波長為 350 nm。

儀器參數(shù)：Cary 8454（圖 3）

–      ChemStation 軟件：      標(biāo)準(zhǔn)模式，定量分析任務(wù)

–      波長：                           350 nm

–      背景校正：                    無

–      校準(zhǔn)曲線類型：            線性

–      重量：                           單位為 mg/L 與體積校正

–      提示：                          用于標(biāo)準(zhǔn)品和樣品信息

圖 3. 紫外-可見 ChemStation 標(biāo)準(zhǔn)模式定量分析任務(wù)中的方法參數(shù)

儀器參數(shù)：Cary 60（圖 4）

–      WinUV 軟件：      “濃度"應(yīng)用程序

–      波長：                 350 nm

–      標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)置：       單位為 mg/L ，3 種標(biāo)準(zhǔn)品，線性擬合

–      重復(fù)次數(shù)：           2 次

圖 4. Cary WinUV“濃度"應(yīng)用程序設(shè)置菜單中的方法參數(shù)

方法

在兩種儀器中均使用高氯酸空白進(jìn)行空白讀數(shù)。對 40 mg/L、 80 mg/L 和 120 mg/L 高氯酸溶液進(jìn)行單次測定，生成校準(zhǔn)曲 線。然后對未知樣品進(jìn)行測定。

結(jié)果

根據(jù)生成的一條校準(zhǔn)曲線，使用 Cary 8454 紫外-可見分光光 度計(jì)測定的未知重鉻酸鉀溶液的濃度為 77.5 mg/L（圖 5）， 使用 Cary 60 測定的濃度為 77.4 mg/L（圖 6），表明兩種系統(tǒng) 能夠獲得相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。

圖 5. 展示樣品/結(jié)果表的紫外-可見 ChemStation 軟件，其中未知重鉻酸鉀樣品 濃度為 77.5 mg/L

圖 6. Cary WinUV 軟件濃度應(yīng)用程序分析報(bào)告，展示重鉻酸鉀未知樣品（樣品 1） 的濃度為 77.4 mg/L

結(jié)論

Cary 8454 紫外-可見分光光度計(jì)和 Cary 60 系統(tǒng)均分析快速且 簡單易用。如本研究所示，兩種系統(tǒng)均有可輕松進(jìn)行方法開發(fā) 的軟件，能夠?qū)崿F(xiàn)常規(guī)紫外-可見方法的快速設(shè)置。

從 Cary 8454 紫外-可見分光光度計(jì)到 Cary 60 紫外-可見分光 光度計(jì)的兩種方法的轉(zhuǎn)移結(jié)果證明，可實(shí)現(xiàn)重現(xiàn)性峰采集以及 準(zhǔn)確的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品測定。

本研究分析結(jié)果表明，Cary 60 紫外-可見分光光度計(jì)（也支持 可選的 21 CFR Part 11 軟件工具）的性能，可確保法規(guī) 監(jiān)管實(shí)驗(yàn)室在使用 Cary 60 執(zhí)行之前為 8453 或 8454 儀器開 發(fā)的方法時(shí)充滿信心。